Question
Download Solution PDFअज्ञात सांद्रता के एक प्रोटीन विलयन (0.2 ml) को 0.8 ml पानी से तनूकृत किया गया।
इस तनूकृत विलयन के 0.5 ml में 4.5 ml बाईयूरेट अभिकर्मक को मिलाया गया तथा रंग के संवर्धन को होने दिया गया इस मिश्रण के अवशोषणांक को 1cm व्यास के एक परखनली में 540 nm पर लिया गया तथा 0.20 पाया गया।
BSA (4 mg/ml) का 0.5 ml साथ में बाईयूरेट का 4.5 ml का अवशोषणांक उपरोक्त प्रकार से करने पर 0.20 पाया गया। अज्ञात अतनूकृत विलयन में प्रोटीन की सांद्रता (mg/ml) क्या है?
Answer (Detailed Solution Below)
Detailed Solution
Download Solution PDFअवधारणा:
- अवशोषण स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री एक ऐसी तकनीक है जो किसी विशेष रासायनिक विलयन के प्रकाश अवशोषण को मापती है। इसका उपयोग विलयन से गुजरने वाले प्रकाश की मात्रा (संप्रेषण) या विलयन द्वारा अवशोषित प्रकाश की मात्रा (अवशोषण) निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
- जब विद्युत चुम्बकीय विकिरण विलयन से होकर गुजरता है तो उसका कुछ भाग अवशोषित हो जाता है, जबकि शेष भाग प्रिज्म से होकर गुजरता है, जिसे अवशोषण स्पेक्ट्रम कहा जाता है।
- किसी पदार्थ का अवशोषण स्पेक्ट्रम बदलती सांद्रता के साथ नहीं बदलता।
- यह बीयर-लैम्बर्ट के नियम पर आधारित है
- लैम्बर्ट नियम के अनुसार, संचरित एकवर्णी प्रकाश की तीव्रता, अवशोषित पदार्थ की मोटाई बढ़ने पर तेजी से घटती है ।
- बीयर नियम के अनुसार, संचरित एकवर्णी प्रकाश की तीव्रता, अवशोषित पदार्थ की सांद्रता बढ़ने पर तेजी से घटती है ।
- बीर का नियम कहता है कि A = εbc, जहाँ A=अवशोषण, ε = मोलर विलोपन गुणांक, b = क्युवेट की पथ लंबाई और c = प्रोटीन की सांद्रता।
- बीर-लैम्बर्ट के नियम की गणितीय अभिव्यक्ति \(A=log\frac{I_0}{I} = \epsilon cl\)
- इसलिए, अवशोषण बनाम सांद्रता प्लॉट के ढलान की गणना करके, हम मोलर विलुप्ति गुणांक प्राप्त कर सकते हैं, क्योंकि अधिकांश उदाहरणों में क्यूवेट की पथ लंबाई (b) 1 cm के बराबर होती है, और ढलान ε के समान मूल्य होता है।
स्पष्टीकरण:
अमिश्रित अज्ञात प्रोटीन विलयन की मात्रा = 0.2ml
प्रोटीन विलयन में मिलाए गए पानी की मात्रा = 0.8ml
प्रोटीन नमूने का कमजोरीकरण कारक \(DF=\frac{V_f}{V_i} = \frac{0.2+0.8}{0.2} = \frac{1.0}{0.2} = 5\)
तनूकृत अज्ञात प्रोटीन का अवशोषण ( \(A_{540}\) ) = 0.2
BSA मानक की सांद्रता = 4mg/ml
BSA का अवशोषण ( \(A_{540}\) ) = 0.2
- यहां, BSA को मानक के रूप में प्रयोग किया जाता है, यदि 4 mg/ml BSA मानक समाधान और अज्ञात तनूकृत प्रोटीन का अवशोषण 0.2 है, तो हम निष्कर्ष निकाल सकते हैं कि तनूकृत अज्ञात प्रोटीन की सांद्रता भी 4 mg/ml है ।
- अब, हमें अज्ञात अमिश्रित प्रोटीन नमूने की सांद्रता का अनुमान लगाना है।
- प्रोटीन को ⅕ तक तनूकृत किया गया था, इसलिए तनूकृत कारक 5 है।
तो, अनिर्धारित अज्ञात प्रोटीन \(= 4 \times dilution factor = 4 \times20 = 20mg/ml\)
अतः, अमिश्रित अज्ञात विलयन की सांद्रता 20mg/ml है।
अतः सही उत्तर विकल्प 1 है।
Last updated on Jun 23, 2025
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